多肽的溶解和储存

多肽的溶解性很大程度上取决于多肽的极性。酸性的蛋白溶解于碱性溶液，而碱性蛋白可溶解于酸性溶液，含有大量不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有机溶剂中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，然后加水（蒸馏水）稀释。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解，因为DMSO可能造成侧链氧化。

多肽溶解测试： 在多肽溶解之前先取小部分进行多肽溶解测试，您需要测试几种不同的溶剂，直到找到最适当的一种(根据实验需求及溶解性实验确定）。超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。（注意: 超声处理会引起溶液发热和多肽降解。）

  1.将每个酸性氨基酸赋值为－1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及C端-COOH。每个碱性氨基酸赋值为＋1，包括精氨酸（R）、赖氨酸（K）、组氨酸（H）以及N端-NH2。然后计算整个多肽的电荷数。

   2.如果整段肽所带电荷是正电荷的，说明该肽是碱性的。可先尝试用蒸馏水来溶解；如果不溶于水，接着尝试用少量10%-25%醋酸溶解，如果仍然失败的话，添加一些TFA（10-50微升）来增溶，然后用水稀释至理想浓度。

   3.如果整段肽所带电荷是负电荷的，说明该肽是酸性的。可先尝试用蒸馏水来溶解；如果不溶于水，可以尝试用PBS（PH 7.4）来溶解，如果再不溶的话，添加少量的碱性溶剂，如0.1 M的碳酸氢铵，然后加水稀释至理想浓度。含有游离半胱氨酸的多肽应溶于脱气的酸性缓冲液中，因为当PH值大于7时，巯基会被迅速氧化成二硫化物。

   4.如果整段肽电荷是零，说明肽是中性的。中性肽通常溶于有机溶剂。首先，尝试添加少量乙腈、甲醇或异丙醇。对于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亚砜溶解，然后用水稀释至理想浓度。对于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。对于有聚集倾向的肽，可添加6M盐酸胍或8M尿素，然后进行必要的稀释。

   为了防止或尽量减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。

多肽的溶解性

溶解性是使用多肽时比较重要的条件。每个氨基酸都有其固有物理特性。如亮氨酸、异亮氨酸、颉氨酸是疏水性的，其他氨基酸如赖氨酸、组氨酸、精氨酸是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性。

吉尔生化合成的所有多肽均是以冻干的形式提供给您，请您在使用之前仔细阅读以下说明书，以确保多肽在溶解和保存过程中不影响您的使用：

1. 如何正确溶解多肽?

溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的，其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性。

注:在多肽溶解之前，建议您先用少量肽来试验最适溶解方法，只有当多肽完全溶解后，才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度

2. 如何溶解易溶性多肽?

一般情况下，多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中。

如果这个肽是不溶于水的，且其是酸性的，加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反，对于碱性的肽，温和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能够帮助多肽溶解。

3. 如何溶解疏水性多肽?

在一些情况下，某些肽具有很高的疏水性时，不易溶解，可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解，这时推荐将多肽溶解于高浓度，然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合，所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释。当您遇到这种情况时，请您注意以下几点说明：

a. DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解，这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。

b. 这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰，请您在溶解考虑到这个问题。

 4. 如果多肽溶解不好该怎么办？

    对于使用多肽的研究人员来说，多肽的溶解经常是一个主要的难题。每个氨基酸都有不同的物理特性，所以不同的多肽有着不同的溶解性。通常方法，多肽首次须溶解于蒸馏水，更适合消毒水。如果溶解还是有问题，请尝试如下步骤：声波降解有助于溶解多肽。少量醋酸稀释溶液（10%浓度）有助于一般多肽的溶解，氨水溶液有助于酸性多肽的溶解。我们还推荐将多肽溶解于高浓度，然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度，因为盐会导致聚合。（所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液。）

   5是否需要在特殊PH值中溶解多肽？

    报告将会指示是否有特殊PH值的要求。 如果有特殊PH值要求，C.O.A报告中会注明。

有些溶解性上写“ACN”，是什么意思？

    “ACN”是乙腈，是用来帮助溶解某些肽的。

多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生, 多肽应溶解在无菌的蒸馏水中, 或者用0.45或0.2μm孔径的滤膜过滤除菌。

包含Cys、Met、Trp的多肽特别容易氧化, 因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。

2. 若多肽不溶于纯水，超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意: 超声处理会引起溶液发热和多肽降解。

多肽保存

多肽一般长期保存需要避光保存，并应保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短时间以室温运输。多肽在 -20℃很稳定，特别是冷冻干燥并保存在干燥器中，在将它们暴露于空气之前， 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将使湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。

对于含Cys, Met orTrP的多肽，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽可易空气氧化， 在封瓶前，慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题简单的那些肽相比，生命期有限。